進口胎牛血清FBS是細胞培養中使用最多的生長因子,因為它含有高水平的營養,用于哺乳動物細胞培養以生產抗體、抗原、干細胞和疫苗的含血清和血清減少培養基的配制。用于免疫測定和印跡的封閉劑,所有胎牛血清都是*可追溯的,并且來自經過審核的供應商。在單獨容器中處理FBS,并對其進行三次0.1μ無菌過濾,消除了任何交叉污染的可能性。
胎牛血清細胞培養過程中一旦發現有黑點出現,首先要肉眼觀察培養基是否混濁;然后在鏡下觀察培養細胞生長的狀態,黑點是否游動。如果細胞被污染,微生物則會大量繁殖,培養基就會迅速變黃、變混濁。污染包括細菌污染、支原體污染等。
如果在鏡下觀察細胞,生長狀態良好,與黑點出現前相比,沒有任何變化,那么可能與以下幾種情況有關:
1.細胞生長過老,破碎的細胞殘骸;
2.血清質量不好,反復凍融的結果;
3.配制培養基的pH值偏高,不宜細胞生長;
4.配制培養基的水質、容器不合格??蓱秒x心、過濾的方法去除這些黑點;
5.培養原代細胞中出現小黑點,可能是原代組織中的雜質,多次傳代可以消除。
胎牛血清細胞培養中如何防止黑點出現:
1.盡可能減少血清凍融次數;
2.培養基無需37℃水??;
3.培養基保持最佳PH值7.0-7.2;
4.嚴格控制配制培養基的水質,容器定期刷洗;
5.掌握細胞傳代的理想時機,細胞切勿生長過老。