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砷鉬酸比色法
發布時間： 2023-01-16 點擊次數： 920次原理
還原糖是具有羰基（>C=O）的糖，能將其它物質還原而其本身被氧化。
（1） 還原糖在堿性條件及有酒石酸鉀鈉存在下加熱，可以定量地還原二價銅離子為一價銅離子，產生磚紅色的氧化亞銅沉淀，其本身被氧化。具體反應如下：
（2）氧化亞銅在酸性條件下，可將鉬酸銨還原，還原型的鉬酸銨再與砷-酸氫二鈉起作用，生成一種藍色復合砷鉬藍，其顏色深淺在一定范圍內與還原糖的含量（即被還原的Cu2O 量）成正比，用標準葡萄糖與砷鉬酸作用，比色后做標準，就可測得樣品還原糖含量。
材料與儀器
植物材料
銅試劑 砷鉬酸試劑 標準葡萄糖原液
分光光度計 具塞刻度試管 水浴鍋 刻度吸管 容量瓶 漏斗 研缽步驟
1.標準曲線的制作：
在一系列刻度試管中，分別加入200μg/mL 標準葡萄糖0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5及0.6 mL，再順序加入蒸餾水2、1.9、1.8、1.7、1.6、1.5 及1.4 mL，配成濃度分別為0、10、20、30、40、50 及60μg/mL 的系列葡萄糖溶液。每試管加入銅試劑2mL，混勻后沸水浴中加熱10min，立即冷卻，再加入2mL 砷鉬酸試劑，振蕩兩分鐘后稀釋到20mL,用分光光度計在620nm 波長下比色，測其光密度OD620nm（做一式兩份）。以糖濃度微克數為橫坐標，光密度OD620nm 為縱坐標，繪制標準曲線。
2.植物樣品中還原糖的提取：
將樣品洗凈，吸干其表面水分，切碎混勻，稱取1g 放入研缽中，加入約0.5g 石英砂，磨成勻漿，加水將樣品由玻璃漏斗沖入100mL 容量瓶中，加水達70-80mL，搖勻后置于80℃恒溫水浴上浸提0.5h。
待上述樣品冷卻后，沉淀蛋白質，加入5%硫酸鋅5mL，再慢慢滴入0.3mol/L Ba(OH)2 5mL，以沉淀蛋白質。振蕩后靜置，至上層出現清液后再加一滴Ba(OH)2,直至無白色沉淀時，向容量瓶加水至刻度。
3.還原糖含量的測定：
過濾上述已定容的樣品液，取5mL 濾液，再定容到100mL（此步視樣品的含糖量而定）。取已稀釋的溶液2mL，與標準葡萄糖顯色法相同：加銅試劑2mL，煮沸10min，加砷鉬酸試劑2mL，振蕩2mL，定容到15ml，620nm 波長下比色，記下光密度OD620nm（至少重復兩次）。
注意事項
比色皿的外面應被擦干凈。常見問題
OD是當光經過一個樣本時，部分光會被吸收。在光譜學，透光率是出射光和入射光強度的比。以上就是本期的內容，更多資訊，歡迎點擊安培生物網站鏈接了解更多技術與產品資訊。
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