Biozellen植物源基質膠在內皮細胞血管生成實驗的操作應用

內皮細胞血管生成實驗步驟

A、試驗材料準備:

1、內皮細胞:臍帶內皮細胞(實驗使用細胞代數需低于五代)

2、內皮細胞專用培養液(含內皮生長所需因子): 自己配置 or 采購市售專用內皮細胞培養液 (如購自Lonza或者Promocell等品牌)

3、生長因子:VEGF,Heparin等(如購自Sigma)

B、膠體制備試劑準備:

1、A膠(1X)制備:將 A膠 (2X) 置于37℃水浴槽回溫10分鐘，確認*溶解。A膠(2X)與含有生長因子(例如VEGF等)的內皮細胞專用培養液，按照1:1比例混合均勻。(例如:將37℃水浴回溫的內皮細胞專用培養液取 0.5mL，直接加至 37 ℃ 已溶解的 0.5 mL A膠 (2X)，配置成 1 mL 的 A膠 (1X)。使用前置于37 ℃，可降低黏度。建議單次使用，勿重復冷凍解凍 A膠 (1X) )

2、A膠 (0.5X) 制備:將上述步驟1的 A膠 (1X)與含有生長因子的內皮細胞專用培養液，按照1:1比例混合均勻。

3、C緩沖溶液 (5 X) 制備 : C緩沖溶液 (10 X) 與預冷的含有生長因子的內皮細胞專用培養液，按照 1:1 比例混合均勻。(例如 : 0.5 mL C緩沖溶液 (10 X) + 0.5 mL 含有生長因子的內皮細胞專用培養液)

C、內皮小管生成實驗準備程序:

1、將 96 孔細胞培養板放置于冰上。

2、加入 50 μl A膠 (0.5X) 平鋪到96孔細胞培養板內。

3、將步驟 2 的培養板置于冰上 10 分鐘。

4、加入 100 μl 冰的C緩沖溶液(5 X)，蓋過步驟3的A膠，在冰上反應15分鐘.(C緩沖溶液用于A膠凝膠反應)

5、待反應15分鐘后，小心的吸出 C 緩沖溶液。

6、加入100μl含有生長因子5 μg/ml VEGF及0.25 mM Heparin之內皮細胞懸浮液，使每孔細胞數目為2.5x10^4 cells/well (細胞濃度為2.5 x 105 cells/mL)。

6.1、(注):建議添加VEGF及Heparin方式如下，取1 mL細胞濃度2.5 x 105 cells/mL的內皮細胞懸浮液進行離心，并收集細胞沉淀。 細胞沉淀物先與0.125 mL的40 μg/ml VEGF及0.125 mL，2 mM Heparin 進行混合5-10分鐘。最后再加入0.75 mL細胞培養液，使VEGF最終濃度為5 μg/ml、Heparin最終濃度為0.25 mM及細胞濃度為2.5 x 105 cells/mL。

7、將細胞培養板在37 ℃, 5 % CO2培養箱培養12小時內完成。(建議內皮細胞觀察時間為6-8小時)

在內皮細胞血管生成實驗的應用編輯

在內皮細胞血管生成實驗中所用到的基質膠產品信息：

美國Biozellen植物源基質膠（貨號B-P-00002系列）編輯

產品描述 ：Biozellen®3D細胞培養基質膠套裝包含整套基質膠、膠體固定液、膠體溶解液，可應用到 3D 細胞培養與微環境應用等；本試劑盒操作便利且可調控基質膠硬度進行多種細胞培養測試等；膠體可快速被固定液分解。（Biozellen®3D細胞培養基質膠套裝為植物來源，無動物源成分、不含酚紅）

貨號： B-P-00002-2、B-P-00002-4、B-P-00002-10

規格： 2ml-kit、4ml-kit 、10ml-kit

保存條件：4℃保存、 保存兩年

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